Efeito antinociceptivo orofacial do ácido oleanólico em zebrafish: evidências da participação dos receptores TRPV1 [Digital]
Dissertação
Português
616.716-009.7
Fortaleza, 2018.
A alta prevalência da dor orofacial na população mundial gera grande sofrimento e incapacidade, acarretando altos custos para saúde pública. As terapêuticas medicamentosas existentes têm pouca eficácia e efeitos colaterais indesejáveis. O ácido oleanólico é um triterpeno pentacíclico com diversas...
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A alta prevalência da dor orofacial na população mundial gera grande sofrimento e incapacidade, acarretando altos custos para saúde pública. As terapêuticas medicamentosas existentes têm pouca eficácia e efeitos colaterais indesejáveis. O ácido oleanólico é um triterpeno pentacíclico com diversas atividades biológicas descritas na literatura, mas ainda não explorado na antinocicepção orofacial em zebrafish. Foi então proposto como objetivo avaliar o efeito antinociceptivo orofacial do ácido oleanólico em zebrafish adulto. Inicialmente, foram realizados experimentos para correlacionar modelos de nocicepção orofacial em zebrafish adultos e camundongos. Em seguida, a nocicepção aguda foi induzida por formalina, capsaicina, cinamaldeído, salina ácida ou glutamato (modelos cutâneos) ou salina hipertônica (modelo corneal) em zebrafish adulto (0,1; 0,3 ou 1,0 mg/mL; via oral; n=6/grupo). Em todos os experimentos foram incluídos grupos Naive (n=6). Em outro conjunto de experimentos, os animais foram pré-tratados com naloxona, L-NAME, azul de metileno, cetamina, cânfora, HC- 030031, ácido mefenâmico, vermelho de rutênio ou amilorida para investigar o mecanismo de antinocicepção do ácido oleanólico. O envolvimento das fibras C aferentes também foi investigado utilizando zebrafish adultos dessensibilizados pela administração repetida de capsaicina. Foi realizando docking molecular entre o ácido oleanólico e o canal TRPV1. A atividade motora dos zebrafish adulto tratados com ácido oleanólico foi avaliada no teste de campo aberto. Por fim, verificou-se o efeito antinociceptivo orofacial do ácido oleanólico (1,0; 3,0 ou 10mg/Kg; via oral) no teste da capsaicina em camundongos (n=6/grupo). O pré-tratamento com ácido oleanólico reduziu significativamente o comportamento nociceptivo associado a dor aguda em camundongos e zebrafish adulto. A antinocicepção foi efetivamente inibida pelo vermelho de rutênio e induzida pela dessensibilização com capsaicina. A presença de transcritos de receptores TRPV1 foi confirmada por RT-PCR em tecido cerebral de zebrafish. Em conformidade com os experimentos in vivo, os estudos de docking molecular indicaram que o ácido oleanólico pode interagir com o TRPV1. Os resultados confirmam a utilização do zebrafish adulto como modelo animal para o estudo da dor orofacial e a relevância farmacológica do ácido oleanólico como inibidor da nocicepção orofacial mediada pelo canal TRPV1.
Palavras-chaves: Ácido oleanólico; Dor orofacial; Zebrafish adulto; TRPV1.
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Palavras-chaves: Ácido oleanólico; Dor orofacial; Zebrafish adulto; TRPV1.
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The high prevalence of orofacial pain in the world population generates great suffering and incapacity, causing high costs for the public health. Existing drug therapies have poor efficacy and undesirable side effects. Oleanolic acid is a pentacyclic triterpene with several biological activities...
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The high prevalence of orofacial pain in the world population generates great suffering and incapacity, causing high costs for the public health. Existing drug therapies have poor efficacy and undesirable side effects. Oleanolic acid is a pentacyclic triterpene with several biological activities described in the literature, but not yet explored in orofacial antinociception in zebrafish. It was then proposed to evaluate the orofacial antinociceptive effect of oleanolic acid in adult zebrafish. Initially, experiments were performed to correlate models of orofacial nociception in zebrafish adults and mice. Then, acute nociception was induced by formalin, capsaicin, cinnamaldehyde, acid saline or glutamate (cutaneous models) or hypertonic saline (corneal model) in adult zebrafish (0.1, 0.3 or 1.0 mg / mL; oral; n = 6 / group).
In all experiments Naive groups (n = 6).In another set of experiments, the animals were pretreated with naloxone, L-NAME, methylene blue, ketamine, camphor, HC-030031, mefenamic acid, ruthenium red or amiloride to investigate the mechanism of antinociception of oleanolic acid.Involvement of the afferent fibers was also investigated using adult zebrafish desensitized by repeated administration of capsaicin. It was performed molecular docking between the oleanolic acid and the TRPV1 channel.The motor activity of adult zebrafish treated with oleanolic acid was evaluated in the open field test. Finally, the orofacial antinociceptive effect of oleanolic acid (1.0, 3.0 or 10mg / kg, oral) was verified in the capsaicin test in mice (n = 6 / group). Pre-treatment with oleanolic acid significantly reduced the nociceptive behavior associated with acute pain in mice and adult zebrafish. Antinociception was effectively inhibited by ruthenium red and induced by desensitization with capsaicin. The presence of TRPV1 receptor transcripts was confirmed by RT-PCR in brain tissue of zebrafish. In accordance with the in vivo experiments, molecular docking studies indicated that oleanolic acid may interact with TRPV1. The results confirm the use of adult zebrafish as an animal model for the study of orofacial pain and the pharmacological relevance of oleanolic acid as an inhibitor of TRPV1 channel-mediated orofacial nociception.
Key words: Oleanolic acid; Orofacial pain; Adult Zebrafish; TRPV1. Ver menos
In all experiments Naive groups (n = 6).In another set of experiments, the animals were pretreated with naloxone, L-NAME, methylene blue, ketamine, camphor, HC-030031, mefenamic acid, ruthenium red or amiloride to investigate the mechanism of antinociception of oleanolic acid.Involvement of the afferent fibers was also investigated using adult zebrafish desensitized by repeated administration of capsaicin. It was performed molecular docking between the oleanolic acid and the TRPV1 channel.The motor activity of adult zebrafish treated with oleanolic acid was evaluated in the open field test. Finally, the orofacial antinociceptive effect of oleanolic acid (1.0, 3.0 or 10mg / kg, oral) was verified in the capsaicin test in mice (n = 6 / group). Pre-treatment with oleanolic acid significantly reduced the nociceptive behavior associated with acute pain in mice and adult zebrafish. Antinociception was effectively inhibited by ruthenium red and induced by desensitization with capsaicin. The presence of TRPV1 receptor transcripts was confirmed by RT-PCR in brain tissue of zebrafish. In accordance with the in vivo experiments, molecular docking studies indicated that oleanolic acid may interact with TRPV1. The results confirm the use of adult zebrafish as an animal model for the study of orofacial pain and the pharmacological relevance of oleanolic acid as an inhibitor of TRPV1 channel-mediated orofacial nociception.
Key words: Oleanolic acid; Orofacial pain; Adult Zebrafish; TRPV1. Ver menos
Barros, Adriana Rolim Campos
Orientador
Magalhães, Francisco Ernani Alves
Coorientador
Barros, Adriana Rolim Campos
Banca examinadora
Abdon, Ana Paula de Vasconcellos
Banca examinadora
Medeiros, Maria Angelina Silva
Banca examinadora
Universidade de Fortaleza. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas
Dissertação (mestrado)